Batería de pruebas API20E.

La batería de pruebas API20E es un sistema de identificación rápida para bacterias de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram (-). Básicamente consta de 21 tests bioquímicos estandarizados y miniaturizados y una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de ser rápido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioquímica distinta. Los microtubos se inoculan con una suspensión de microorganismos, en agua o solución salina, que rehidrata los medios. Las tiras o galerías se incuban a 37°C y por efecto del metabolismo bacteriano se producen cambios de color espontáneos o bien por la adicción de reactivos. La lectura de las reacciones se hace mediante comparación con una tabla de lectura donde se indica si los microorganismos deben considerarse positivos o negativos para cada reacción según el color aparecido.

A. Batería de pruebas incluidas y tablas de lectura con coloraciones positivas y negativas

Pueba	Reacción / Enzimas	Negativo	Positivo
ONPG	beta-galactosidasa	sin color	amarillo
ADH	arginina deshidrolasa	amarillo	rojo o naranja
LDC	lisina descarboxilasa	amarillo	rojo o naranja
ODC	ornitina descarboxilasa	amarillo	rojo o naranja
CIT	utilización del citrato	verde	azul oscuro o turquesa
H2S	producción de H2S	sin precipitado negro	precipitado negro
URE	ureasa	amarillo	rojo o naranja
TDA	triptófano desaminasa	amarillo	marrón-rojo
IND	producción de indol	amarillo	color rosa o anillo rosa-rojo
VP	producción de acetoína (Voges-Proskauer)	sin color	rosa-rojo
GEL	gelatinasa	sin difusión	difusión de pigmento
GLU	fermentación/oxidación de glucosa	azul o verde	amarillo
MAN	fermentación/oxidación de manitol	azul o verde	amarillo
INO	fermentación/oxidación de inositol	azul o verde	amarillo
SOR	fermentación/oxidación de sorbitol	azul o verde	amarillo
RHA	fermentación/oxidación de ramnosa	azul o verde	amarillo
SAC	fermentación/oxidación de sacarosa	azul o verde	amarillo
MEL	fermentación/oxidación de melobiosa	azul o verde	amarillo
AMY	fermentación/oxidación de amigdalina	azul o verde	amarillo
ARA	fermentación/oxidación de arabinosa	azul o verde	amarillo
OX	citocromo oxidasa

B. Etapas del procedimiento (Ver vídeo Procedimiento API20E)

Preparación de la suspensión bacteriana
Tomar una colonia bien aislada de cada microorganismo y resuspenderla homogéneamente en 5 mL de solución salina (1% de NaCl) o 5 mL de agua estéril.
Siembra de la galería API
Cada pocillo tiene un tubo y una cúpula (parte aerobia).
Llenar con la suspensión de bacterias los tubos, no la cúpula, de todos los pocillos.
Llenar la cúpula de los pocillos CIT , VP, GEL con la suspensión de bacterias.
Tapar con parafina líquida
Llenar con parafina las cúpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H2S para obtener anaerobiosis.
Poner la galería en su propia cámara húmeda de incubación
Poner la tira en su propia cámara húmeda de incubación. Previamente poner agua en los alvéolos de la cámara para proporcionar una atmósfera húmeda durante la incubación.
Incubación en estufa
Incubar a 37 °C durante 18-24 h.
Anotar los resultados inmediatos
La lectura de los resultados se lleva a cabo por comparación de los colores de cada pocillo con los de las tablas de lectura. Ver tabla de lectura (colores en imagen) en otra pantalla Ver tabla de lectura (colores en texto) en otra pantalla Y anotando el resultado como positivo o negativo
Revelado de pruebas que requieren reactivos (Ver vídeo revelado y lectura API20E)
Para la lectura se tienen en cuenta los siguientes criterios: Si la glucosa da negativo y los tests positivos son 2 o menos de 2, no hay que añadir reactivos. Cuando ésto ocurre se hacen otros tipos de API como el API 20NE, API OF, el API M o el API 10S para ver determinados metabolismos especiales. Si la glucosa es positiva y/o 3 o más tests son positivos se revelan los test que requieren reactivos:
TDA Añadir una gota de FeCl3 10 %. Positivo = color marrón oscuro.
VP Añadir una gota del reactivo 1 (KOH al 40%) y una gota del reactivo 2 (C2 H5 OH). Positivo = color rosa fuerte o rojo en 5-10 minutos.
IND Añadir una gota de reactivo de Kovacs (1) o de Dimetilamino-cinamaldehido (2). Dependiendo del reactivo utilizado pueden darse las posibilidades siguientes: (1)Positivo = aparece un anillo rosa-rojo (2)Positivo =color de rosa a morado en todo el pocillo
Oxidasa Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recién preparado. Positivo = color azul que aparece inmediatamente
Anotar el resto de resultados
La lectura de los resultados se lleva a cabo por comparación de los colores de cada pocillo con los de las tablas de lectura. Ver tabla de lectura (colores en imagen) en otra pantalla Ver tabla de lectura (colores en texto) en otra pantalla Y anotando el resultado como positivo o negativo
Perfil numérico e identificación
Del conjunto de reacciones y resultados se obtiene un perfil numérico de 7 cifras. Los pocillos están separados en grupos de tres: en total tenemos 7 grupos de tres tubos o tripletes (el test número 21 corresponde al test de la oxidasa). A cada pocillo se le da el valor 0, 1, 2 o 4. o Si la reacción es negativa se pone 0. o Si la reacción es positiva se pone: 1 si es el primer pocillo de un triplete, 2 si es el segundo, 4 si es el tercero. o Se suman los valores de cada triplete y se obtiene un código de 7 cifras. o Con este código se busca en la tabla de identificación la especie de que se trata.

C. Entrenamiento en la lectura de los resultados positivos o negativos de cada prueba

En las tablas de lectura del comienzo de este ejercicio se muestran los colores de los resultados positivos y negativos para cada prueba. Para irse familiarizando con dichos resultados le proponemos realizar estos ejercicios de entrenamiento aconsejando que consulte también las dos tablas a que nos hemos referido anteriomente (colores en modo imagen y en modo texto). Para ello: Observe la imagen del supuesto práctico para cada prueba (columna) Compare con las imágenes de resultados positivos y negativos de esa prueba de esta tabla y de las otras 2 anteriores, y Conteste a la preguntas de entrenamiento para esa prueba, haciendo clic sobre la letra azul que antecede a la opción.
Pruebas	ONPG	ADH	H2S	URE	GEL	GLU	RHA
Resultado Negativo	sin color	amarillo	sin precipitado negro	amarillo	sin difusión	azul o verde	azul o verde
Resultado Positivo	amarillo	rojo o naranja	precipitado negro	rojo o naranja	difusión de pigmento	amarillo	amarillo
Supuesto práctico
Contestar Preguntas de entrenamiento	RESULTADO: a ) Negativo b ) Positivo	RESULTADO: a ) Negativo b ) Positivo	RESULTADO: a ) Negativo b ) Positivo	RESULTADO: a ) Negativo b ) Positivo	RESULTADO: a ) Negativo b ) Positivo	RESULTADO: a ) Negativo b ) Positivo	RESULTADO: a ) Negativo b ) Positivo

D. Entrenamiento en la codificación de los tripletes y en la interpretación de los colores de cada prueba

Para irse familiarizando con la codificación de los tripletes, así como con la determinación de los resultados positivos y negativos para cada prueba, le proponemos realizar estos ejercicios de entrenamiento aconsejando que consulte tambien las dos tablas de lectura que hemos referido anteriomente (colores en modo imagen y en modo texto). Para ello: Por cada triplete, observe la coloración obtenida en los resultados de las 3 pruebas de ese triplete Compare esas imágenes con los resultados positivos y negativos de esas 3 pruebas en las tablas de lectura Ver tabla de lectura (colores en imagen) en otra pantalla Ver tabla de lectura (colores en texto) en otra pantalla Adjudique a cada prueba el correspondiente valor (negativo=0; positivo=1, 2, o 4 según posición en el triplete) Sume los 3 valores Conteste a la preguntas de entrenamiento para esa prueba, haciendo clic sobreel número correspondiente.
0 - 1 - 2 - 3 - 4 - 5 - 6 - 7	0 - 1 - 2 - 3 - 4 - 5 - 6 - 7	0 - 1 - 3 - 4 - 5 - 6 - 7
0 - 1 - 3 - 4 - 5 - 6 - 7	0 - 1 - 3 - 4 - 5 - 6 - 7	0 - 1 - 3 - 4 - 5 - 6 - 7
0 - 1 - 3 - 4 - 5 - 6 - 7	0 - 1 - 3 - 4 - 5 - 6 - 7	0 - 1 - 2 - 3 - 4 - 5 - 6 - 7

E. Perfil numérico e identificación de tres aislados problema del supuesto práctico

En los 3 casos del supuesto práctico realize lo siguiente: Interpretar y anotar los resultados positivos o negativos de cada una de las 21 pruebas Codificar los 7 tripletes Obtener el perfil numérico de 7 cifras e introducirlo en el área correspondiente para su envio al servidor Convertir ese perfil numérico en el nombre de la especie o género a la que pertenece utilizando un extracto de la basa de datos Ver extracto de base de datos con algunos perfiles numéricos
Aislado # 1 del supuesto práctico
Resultados
Perfil numérico	Introduzca el perfil numérico de 7 cifras: Ver perfiles numéricos
Identificación	Haga clic sobre el radio botón de la especie a la que corresponden los resultados y el perfil numérico obtenido
	Acinetobacter calcoaceticus Enterobacter cloacae Enterobacter gergoviae Escherichia coli Hafnia alvei	Klebsiella oxytoca Klebsiella pneumoniae Plesiomonas shigelloides Proteus mirabilis Proteus vulgaris
Aislado # 2 del supuesto práctico
Resultados
Perfil numérico	Introduzca el perfil numérico de 7 cifras: Ver perfiles numéricos
Identificación	Haga clic sobre el radio botón de la especie a la que corresponden los resultados y el perfil numérico obtenido
	Pasteurella multocida Plesiomonas shigelloides Proteus mirabilis Proteus vulgaris Pseudomonas aeruginosa	Salmonella arizonae Salmonella gallinarum Salmonella paratyphi A Salmonella spp. Salmonella typhi
Aislado #3 del supuesto práctico
Resultados
Perfil numérico	Introduzca el perfil numérico de 7 cifras: Ver perfiles numéricos
Identificación	Haga clic sobre el radio botón de la especie a la que corresponden los resultados y el perfil numérico obtenido
	Serratia marcescens Serratia odorifera Serratia rubidae Shigella boydii Shigella flexneri	Vibrio cholerae Vibrio parahemolyticus Yersinia enterocolitica Yersinia pseudotuberculosis Yersinia ruckeri

M.- Envío al servidor de los resultados del ejercicio