ContinuarCapítulo 5:
Técnica aséptica. Obtención de un cultivo puro. Técnicas
de siembra.
Sección
3: Técnicas de siembra
Existen distintos tipo de técnicas de siembra según el tipo de medio del que partimos y el tipo de medio en el que sembramos.
Para la inoculación de un medio líquido a partir de un cultivo en medio sólido se utiliza un asa de siembra.
Para la inoculación de un medio líquido a partir de un cultivo en medio líquido se utiliza una pipeta estéril y en algunos casos un asas de siembra.
Para la inoculación de un medio sólido a partir de un cultivo en otro medio sólido se utiliza normalmente un asa de siembra y se suele sembrar por agotamiento en estría para conseguir colonias separadas y poder obtener un cultivo puro.
En el caso de que el cultivo en medio sólido del que partimos este sembrado en la profundidad del agar (tanto en placa como en tubo) se utiliza un pincho o aguja de siembra. También en este caso se suele se suele sembrar por agotamiento en estría para conseguir colonias separadas y poder obtener un cultivo puro.
En este caso se pueden realizar dos tipos de siembra : a) siembra en profundidad y b) siembra sobre la superficie inclinada del agar.
La siembra en profundidad en un medio sólido en tubo se realiza con una aguja de siembra y consiste en tomar parte del cultivo de la placa o tubo de partida e introducir la aguja de siembra de forma vertical en el agar del tubo que queremos sembrar.
Sembramos en un agar que se ha dejado solidificar inclinado en un tubo. Se puede hacer con aguja de siembra o con asa de siembra. Consiste en tomar parte del cultivo de la placa o tubo de partida e introducir la aguja o el asas de siembra en el tubo que queremos sembrar y depositar el inóculo sobre la superficie inclinada. Normalmente se hace en zig-zag
La siembra de un medio sólido en placa a partir de medio líquido se puede hacer con asa de siembra o con pipeta, a su vez la siembra con pipeta puede ser en superficie o en masa.
Se toma parte del cultivo líquido crecido con el asa y se siembra en la placa de agar. Habitualmente se siembra por agotamiento en estría para conseguir colonias separadas.
En este caso se toma una cantidad determinada (normalmente 0,1 mL) del medio líquido crecido y se deposita sobre la superficie del agar. Inmediatamente se extiende el inóculo por toda la superficie del agar mediante un asa de Driglasky estéril. Antes de llevar a incubar se espera unos minutos a que se seque el inóculo que acabamos de extender.
De esta forma conseguiremos que crezcan sobre la superficie del agar colonias separadas que podremos contar.En este caso se toma una cantidad determinada (normalmente 1 mL) de medio líquido crecido y se deposita en una placa de petri vacía y estéril. Inmediatamente añadimos 20 mL de agar fundido y que este a una temperatura de unos 50ºC. Homogenizamos el inóculo con el agar aplicando movimientos circulares y de vaivén a la placa. Esperamos unos 30 minutos hasta que el agar solidifique y llevamos las placas a incubar.
De esta forma conseguiremos que crezcan en la masa del agar colonias separadas que podremos contar.La siembra de un medio sólido en tubo a partir de un medio líquido se hace con pipeta y es una siembra en masa.
Debemos tener preparado el medio sólido en el que vamos a sembrar en un tubo (normalmente 20 mL de medio sólido/tubo) licuado a temperatura de 50ºC. Sobre este medio depositamos con pipeta 1 ml del cultivo líquido crecido e inmediatamente mezclamos el inóculo con el agar en un agitador de tubos o bién manualmente. Esperamos al menos 30 minutos a que solidique el agar y llevamos a incubar.
De esta forma conseguiremos que crezcan en la masa del agar colonias separadas que podremos contar.
