ContinuarCapítulo 7:
Técnicas básicas de identificación bacteriana
Sección
2: Sistemas convencionales de identificación bacteriana
La identificación de una bacteria es su asignación a un taxón según una clasificación dada. Las características a determinar y su número depende principalmente del tipo de bacteria y del fin que se persigue en la identificación.
A continuación se expone el esquema más habitual para la identificación de una cepa bacteriana desde el punto de vista bioquímico.
Obviamente, en la identificación bacteriana hay que partir de un cultivo puro obtenido en el aislamiento, como se ha expuesto más arriba en el capítulo 5, subcultivando de una colonia bien aislada. Es aconsejable realizar un comprobación efectuando una en la que crezcan únicamente colonias del mismo tipo.
Examen microscópico de células vivas y de frotis teñido por coloración Gram. Se determina así la forma y el Gram del microorganismo en estudio. También es importante determinar la agrupación y la presencia de esporas y otras características morfológicas de interés.
Determinar las características nutricionales (en general se desprenden de los métodos empleados en el aislamiento y cultivo anteriores); fotoautótrofos, fotoheterótrofos, quimioautótrofos, quimioheterótrofos.
Se utilizan un grupo de pruebas, denominadas pruebas primarias, con las cuales se puede determinar el género, grupo de géneros o en algún caso familia a la que pertenece un aislamiento. Las pruebas primarias suelen ser: Gram, morfología, catalasa, oxidasa, Oxidación-Fermentación, fermentación de glucosa, esporas, movilidad, crecimiento en aerobiosis y anaerobiosis.
Realización de pruebas secundarias y terciarias a efectos de llegar a especie. Estas dependerán del género o familia determinado. (ej: producción de pigmentos, producción de indol a partir de triptofano, producción de coagulasa, de fenilalanina deaminasa, etc.)
A la determinación de la especie se puede llegar según diversas pautas de utilización de las pruebas primarias, secundarias y terciarias. Una pauta es a base de múltiples pasos, realizando en cada paso una o unas pocas pruebas. Otra pauta es combinar un número mayor de pruebas en un sólo paso
La identificación de un aislamiento bacteriano puede realizarse utilizando diferentes combinaciones de características y diferentes criterios en la evaluación de similitudes.
Los ensayos bioquímicos tradicionalmente utilizados, llamadas pruebas bioquímicas convencionales, generalmente determinan la actividad de una vía metabólica (conjunto de reacciones químicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no.
Existen diferentes sistemas comerciales que facilitan la realización de tales ensayos, porque proponen el mejor conjunto de pruebas bioquímicas para la identificación de un grupo bacteriano, porque simplifican la interpretación de un resultado utilizando un valor numérico, porque proveen los reactivos prontos para su uso o porque son totalmente automatizables.
Utilizan modificaciones de las pruebas bioquímicas convencionales, ya sea sustratos deshidratados, tiras de papel de filtro impregnadas en reactivos o pequeños compartimentos con medios prontos para sembrar. En todos los casos se emplean códigos numéricos para la interpretación de resultados. Aunque existe una gran variedad, los sistemas comerciales más comúnmente usados son API y Enterotube.
Es un sistema estandarizado para la identificación de Bacterias Gram -. Consiste en una plantilla con microtubos conteniendo medios de cultivo deshidratados que se reconstituyen al agregar una suspensión bacteriana. Permite la realización de 23 pruebas bioquímicas a partir de una única colonia bacteriana.
Es un sistema pronto para usar para la identificación de Enterobacterias, definida como bastones Gram -, aerobios o anaerobios facultativos, oxidasa (-). Consiste en un tubo de plástico con 12 medios de cultivo contenidos en compartimentos individuales que se inoculan simultáneamente en una etapa y permiten la detección de 15 características bioquímicas.
